Development of novel columns for determination of various diuretics by capillary electrochromatography

Abstract

Diuretics are active pharmaceutical compounds that are used for the treatment of edema, cirrhosis, hypertension and renal failure. World Anti-Doping Agency has announced diuretics as banned compounds. Because they are used as a masking and doping agent. In this study, target compounds are therapeutically important groups of this active pharmaceuticals; namely thiazides (bendroflumethiazide, chlorothiazide, hydrochlorothiazide). Sol-gel chemistry and molecularly imprinted polymers (MIPs) methodology were offered for preparing the column for capillary electrochromatography (CEC) for determination of thiazides. Modified silica sol-gel (amine and phenyl modified) and MIPs were synthesized through different routes (inorganic and organic form) as filling materials for capillary columns. Materials which were filled into the column were selected by the help of sorption studies prior to CE-DAD analysis. For this purpose, critical experimental parameters of CE-DAD were optimized and determined as follows; background electrolyte type of borate buffer (10mM) and pH of 9.4, voltage of 25 kV, cassette temperature of 30℃. Limit of detection (LOD) were calculated as between 0.20 mg L-1 and 0.30 mg L-1. Limit of quantification (LOQ) was found as between 0.44 mg L-1 and 0.99 mg L-1. Finally, sorbents having best sorption capacity towards the analytes were prepared as a stationary phase of capillary column and analysis was done with CEC-DAD.

Diüretikler ödem, siroz, hipertansiyon ve böbrek yetmezliğini tedavi etmek için kullanılan aktif farmasötik bileşiklerdir. Dünya Anti-Doping Ajansı (WADA), diüretikleri yasaklı maddeler arasında yayınlamıştır. Doping maddesi olarak ve doping maddelerini maskeleyici ajan olarak kullanası nedeniyle bu listede yer almıştır. Bu çalışmada, hedef bileşikler diüretik aktif farmasötiklerin terapötik olarak önemli bir grubu olan tiazidler olarak belirlenmiştir (bendroflumetiazide, klorotiazide ve hidroklorotiazid). Tiyazidlerin belirlenmesinde kullanılacak kapiller elektrokromatografi’nin (CEC) kılcal kolonunun hazırlanması için sol-jel kimyası ve moleküler baskılanmış polimer (MIP) metodolojisi önerilmiştir. Modifiye silika sol-jeller (amin ve fenil modifiyeli) ve farklı MIP materyalleri (inorganik ve organik formda olanlar) durgun faz olarak kullanılmak için sentezlenmiştir. Kolon içine yüklenecek maddenin seçimi için kapiller elektroforez (CE) öncesinde sorpsiyon çalışması yapılmış. Bu amaca bağlı olarak, kritik deneysel parametreler optimize edilmiş ve tampon çözeltisi olarak 10 mM borat solüsyonu seçilip pH için 9.4 en uygun değer olarak belirlenmiş, çalışma voltajı ise 25 kV olarak, kaset sıcaklığı 30℃ olarak sabitlenmiştir. Tespit limiti (LOD) 0.20 mg L-1 ile 0.30 mg L-1, tayin limiti (LOQ) 0.44 mg L-1 ile 0.99 mg L-1 arasında bulunmuştur. Çalışmanın sonucunda hedef bileşiklere yönelik en yüksek sorpsiyon kapasitesine sahip olan maddeler kapiller kolon içine durgun faz olarak uygulanmış ve analizler CECDAD ile yapılmıştır.