Please use this identifier to cite or link to this item: https://hdl.handle.net/11147/5729
Title: Nucleofection effects on human T cells as a non-viral transfection technique
Other Titles: Viral olmayan transfeksiyon tekniği olarak nükleofeksiyonun insan T hücreleri üzerindeki etkileri
Authors: Nalbant Aldanmaz, Ayten
Güler, Seminay
Keywords: Nucleofection technology
Transfect cells
Human T cells
CD4 T cells
Jurkat cells
Transfection methods
Issue Date: Dec-2016
Publisher: Izmir Institute of Technology
Source: Güler, S. (2016). Nucleofection effects on human T cells as a non-viral transfection technique. Unpublished master's thesis, İzmir Institute of Technology, İzmir, Turkey
Abstract: In times of quickly developing ways of immunological approaches applying on cells, nucleic acid delivery becomes a fundamental process. The ways of delivering nucleic acids mainly affects the consequence of immunological response. The nucleofection technology which is a modified form of electroporation is reliable method for transfection of hard to transfect cells. In the current study, we compared naive CD4 T cells and Jurkat cells in terms of nucleofection efficiency and cell viability. Naive CD4 T cells and Jurkat cells were transfected with pmax GFP at different time points. Out of 5 different nucleofection programs, one for naive CD4 T cells was identified. Jurkat cells were also transfected with one nucleofection program. Flow cytometric analyses of nucleofected naive CD4 T cells and Jurkat cells indicated that transfection efficiency significantly increased at 48h post transfection. We also differentiated naive CD4 T cells into T helper 17 cell phenotype by using certain stimulants and we activated Jurkat cells by using PMA and Ionomycin. We found that GFP was efficiently taken up by both T helper 17 cells and activated Jurkat cells. Therefore, nucleofection significantly holds important place in transfecting of hard to transfect cells including primary human CD4 T cells.
Hücreler üzerine uygulanan immünolojik yaklaşımların hızla arttığı bu dönemde nükleik asitlerin hücre içine gönderilmesi önemli bir işlem haline gelmiştir. Elektroporasyona dayalı bir metod olan nükleofeksiyon, transfeksiyonu zor olan hücreler için güvenilir bir teknolojidir. Bu çalışmada naive CD4 T hücreleri ve Jurkat hücreleri transfeksiyon verimliliği ve hücre yaşayabilirliği yönünden karşılaştırıldı. Naive CD4 T hücreleri ve Jurkat hücreleri farklı zaman dilimlerinde pmax GFP ile transfekte edildi. 5 farklı nükleofeksiyon programından bir tanesi naive CD4 T hücreleri için tanımlandı ve yapılan deneylerle doğrulandı. Ayrıca Jurkat hücreleri de onlara özgü nükleofeksiyon programı uygulanarak transfekte edildi. Akım sitometrisi analizleri sonucunda hem naive CD4 T hücrelerinde hemde Jurkat hücrelerinde GFP ifadesinin transfeksiyondan 48 saat sonra önemli derecede arttığı gözlemlendi. Bu çalışmada T helper 17 hücrelerinin ve aktifleştirilmiş Jurkat hücrelerinin nükleofeksiyonu da araştırıldı. Bu hücrelerin de GFP’yi verimli bir şekilde hücre içine aldıkları görüldü. Böylece, nükleofeksiyonun transfeksiyonu zor olan hücrelerin transfeksiyonunda kullanılabilecek yararlı bir metod olduğu saptandı.
Description: Thesis (Master)--Izmir Institute of Technology, Molecular Biology and Genetics, Izmir, 2016
Includes bibliographical references (leaves. 40-43)
Text in English; Abstract: Turkish and English
Full text release delayed at author's request until 2020.01.12
x, 42 leaves
URI: http://hdl.handle.net/11147/5729
Appears in Collections:Master Degree / Yüksek Lisans Tezleri

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
T001573.pdfMasterThesis1.9 MBAdobe PDFThumbnail
View/Open
Show full item record

CORE Recommender

Page view(s)

28
checked on Dec 6, 2021

Download(s)

6
checked on Dec 6, 2021

Google ScholarTM

Check


Items in GCRIS Repository are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.