Nucleofection Effects on Human T Cells as a Non-Viral Transfection Technique

Abstract

In times of quickly developing ways of immunological approaches applying on cells, nucleic acid delivery becomes a fundamental process. The ways of delivering nucleic acids mainly affects the consequence of immunological response. The nucleofection technology which is a modified form of electroporation is reliable method for transfection of hard to transfect cells. In the current study, we compared naive CD4 T cells and Jurkat cells in terms of nucleofection efficiency and cell viability. Naive CD4 T cells and Jurkat cells were transfected with pmax GFP at different time points. Out of 5 different nucleofection programs, one for naive CD4 T cells was identified. Jurkat cells were also transfected with one nucleofection program. Flow cytometric analyses of nucleofected naive CD4 T cells and Jurkat cells indicated that transfection efficiency significantly increased at 48h post transfection. We also differentiated naive CD4 T cells into T helper 17 cell phenotype by using certain stimulants and we activated Jurkat cells by using PMA and Ionomycin. We found that GFP was efficiently taken up by both T helper 17 cells and activated Jurkat cells. Therefore, nucleofection significantly holds important place in transfecting of hard to transfect cells including primary human CD4 T cells.Hücreler üzerine uygulanan immünolojik yaklaşımların hızla arttığı bu dönemde nükleik asitlerin hücre içine gönderilmesi önemli bir işlem haline gelmiştir. Elektroporasyona dayalı bir metod olan nükleofeksiyon, transfeksiyonu zor olan hücreler için güvenilir bir teknolojidir. Bu çalışmada naive CD4 T hücreleri ve Jurkat hücreleri transfeksiyon verimliliği ve hücre yaşayabilirliği yönünden karşılaştırıldı. Naive CD4 T hücreleri ve Jurkat hücreleri farklı zaman dilimlerinde pmax GFP ile transfekte edildi. 5 farklı nükleofeksiyon programından bir tanesi naive CD4 T hücreleri için tanımlandı ve yapılan deneylerle doğrulandı. Ayrıca Jurkat hücreleri de onlara özgü nükleofeksiyon programı uygulanarak transfekte edildi. Akım sitometrisi analizleri sonucunda hem naive CD4 T hücrelerinde hemde Jurkat hücrelerinde GFP ifadesinin transfeksiyondan 48 saat sonra önemli derecede arttığı gözlemlendi. Bu çalışmada T helper 17 hücrelerinin ve aktifleştirilmiş Jurkat hücrelerinin nükleofeksiyonu da araştırıldı. Bu hücrelerin de GFP’yi verimli bir şekilde hücre içine aldıkları görüldü. Böylece, nükleofeksiyonun transfeksiyonu zor olan hücrelerin transfeksiyonunda kullanılabilecek yararlı bir metod olduğu saptandı.